Journal des sciences vétérinaires et du diagnostic médical

Développement d'un test immuno-enzymatique basé sur une protéine de nucléocapside recombinante pour la détection sérologique de la dysenterie hivernale

Kanokwan Singasa, Taweesak Songserm, Preeda Lertwatcharasarakul, Siriluk Jala, Sakuna Phattanakunanan et Pipat Arunvipas

La dysenterie hivernale est une maladie virale aiguë et contagieuse qui affecte négativement les vaches laitières dans les fermes en Thaïlande. Un test immuno-enzymatique indirect (ELISA) basé sur la protéine de nucléocapside recombinante (rN) qui a été développée pour la détection d'anticorps contre la dysenterie hivernale a été produit par un système d'expression de protéines d'Escherichia coli. La protéine N de l'antigène épitopique a été conçue en utilisant presque tous les fragments du gène N (8-430 aa, gène N). Elle a été identifiée comme étant d'environ 48 kDa en tant que protéine rN et peut se lier au sérum positif au coronavirus bovin des vaches laitières par analyse Western blot. Les conditions de la méthode ELISA ont été optimisées. La protéine rN a été standardisée avec une concentration d'antigène de revêtement de 5 μg/puits. La protéine rN a été testée avec des sérums de vaches laitières infectées et non infectées. La dilution des anticorps primaires a été identifiée comme étant de 1:50 à l'aide d'un titrage en damier. Les tests intra et inter-tests étaient répétables. La valeur limite de la DO450 corrigée par rapport à la moyenne ± 2SD (écarts types) a été établie à 0,049. Le pourcentage de spécificité, de sensibilité et de précision entre le rNELISA développé et un kit ELISA SVANOVIR® BCV-Ab était respectivement de 96,3, 84,8 et 86,1 %. La valeur kappa de Cohen de l'ELISA développé par rapport au kit de test commercial était de 0,71. Le coefficient de corrélation des valeurs d'absorption de ces deux tests était de 0,68. La méthode ELISA de la protéine de nucléocapside recombinante pourrait être utile pour le diagnostic et la surveillance du coronavirus bovin.