Journal des sciences vétérinaires et du diagnostic médical

Application d'antigènes recombinants marqués à l'histidine dans le diagnostic des infections virales

Mohammad M Hossain et Raymond R Rowland

Les protéines marquées à l'histidine sont fréquemment détectées à l'aide d'anticorps spécifiques à l'étiquette histidine ; ceux-ci sont utiles dans les études immunologiques. Un anticorps monoclonal penta-His (mAb) a été utilisé pour estimer la quantité relative de protéine recombinante attachée à chaque jeu de billes de microsphères dans un immuno-essai sur microsphères fluorescentes (FMIA). Dans cette étude, l'utilisation de l'anticorps monoclonal anti-His pour la détection d'antigènes recombinants de sept virus animaux différents : virus du syndrome dysgénésique et respiratoire porcin (PRRSV), circovirus porcin de type 2 (PCV2), virus de la grippe porcine (SIV), virus de la peste porcine africaine (ASFV), virus de la peste porcine classique (CSFV), virus de la diarrhée virale bovine (BVDV) et virus de la fièvre de la vallée du Rift (RVFV) liés à des billes de microsphères après couplage a été testée. Les protéines ont été produites sous forme de protéine de fusion 6xHis-ubiquitine et couplées de manière covalente à des billes de microsphères carboxylées en polystyrène Luminex MagPlex®. Les antigènes cibles ont été assemblés en un seul multiplex et testés en présence d'un anticorps monoclonal anti-His-tag. Les résultats ont été rapportés sous forme d'intensité de fluorescence moyenne (MFI). L'interaction entre les antigènes recombinants marqués His et l'anticorps monoclonal anti-His-tag a été testée à l'aide d'un peptide bloquant l'His-tag. Les résultats de l'essai de blocage de l'His-tag ont montré que 1 μg/ml de peptide bloquant l'His-tag peut inhiber complètement l'interaction des antigènes marqués His et de l'anticorps monoclonal anti-Hism. Les valeurs MFI pour les échantillons de sérum négatifs ont montré une réduction de 10 à 40 fois par rapport aux sérums positifs au PRRSV-N, au PCV2, au SIV, au ASFV, au CSFV et au BVDV. Par conséquent, l'utilisation de l'anticorps monoclonal anti-His fournit un moyen pratique d'évaluer la liaison de l'antigène aux billes.