Journal international de recherche cardiovasculaire

Fiabilité test-retest de la quantification par cytométrie de flux des cellules endothéliales circulantes et des cellules progénitrices endothéliales dans les maladies cardiovasculaires

Joséphine Wagner1, Fabian Weisrock1, Max Fritschka2, Sebastian Beckmann1, Simon Litmeier1, Elvis Tahirovic1, Sara Radenovic3, Andreas Busjahn4, Thomas Krahn5, Wilfried Dinh6* et Hans-Dirk Düngen1*#

Les cellules endothéliales circulantes (CEC) et les cellules progénitrices endothéliales (EPC) gagnent en importance en tant que biomarqueurs de substitution quantifiables du dysfonctionnement endothélial (DE). L'absence d'une définition commune et, par conséquent, d'une méthode de quantification standardisée, a limité l'applicabilité clinique de ces biomarqueurs. Une méthode fiable, reproductible et pratique est nécessaire pour atteindre le plein potentiel de ces paramètres. L'objectif de cette étude était d'évaluer la fiabilité test-retest sur une courte période (~7 jours) de quantification par cytométrie de flux des CEC et des EPC dans le sang total humain de patients atteints de maladies cardiovasculaires. 100 patients (âge moyen, 65 ± 10 ans, 30 femmes) ont été inclus dans une étude prospective composée de 4 groupes de patients : insuffisance cardiaque avec fraction d'éjection réduite (ICFEr ; n = 25), insuffisance cardiaque avec fraction d'éjection préservée (ICFEp ; n = 26), néphropathie diabétique (ND ; n = 25) et hypertension (HTA ; n = 24). De plus, 11 volontaires sains ont été inclus comme groupe témoin. Lors de 2 visites d'étude, un échantillon de sang a été prélevé, qui a subi une séquence identique de préparation et d'analyse. Les CEC (ADN+, CD45dim, CD31+ et CD146+) et les EPC (CD45dim, CD34br, CD133+ et CD31+, FSClow– medium, SSClow) ont été comptés par cytométrie de flux. Pour évaluer la fiabilité du test-retest à court terme, la corrélation (corrélation intraclasse) et la concordance (graphique de Bland-Altman) des mesures obtenues lors des 2 visites d'étude ont été évaluées. Chez tous les patients, les médianes de CEC/ml et d'EPC/ml étaient respectivement de 12 (5e/95e percentile : 6/22) et 679 (447/1281) à la visite 1 et de 11 (6/24) et 736 (510/1105) à la visite 2 ; la corrélation intraclasse (ICC) était faible pour le nombre de CEC (0,106 ; ICC - IC à 95 % -0,08-0,29) et bonne pour le nombre d'EPC (0,9 ; 0,86-0,93). Français Chez les patients atteints d'ICFEp, l'ICC était faible pour le nombre de CEC (0,294 ; IC à 95 % -0,08–0,6) et modéré en force pour le nombre d'EPC (0,694 ; 0,43–0,85). Chez les patients atteints d'ICFEr, l'ICC était faible pour le nombre de CEC (0,076 ; -0,32–0,45) et excellent en force pour le nombre d'EPC (0,946 ; 0,88–0,98). Chez les patients atteints de DN, l'ICC était faible pour le nombre de CEC (-0,031 ; -0,44–0,37) et excellent en force pour le nombre d'EPC (0,946 ; 0,88–0,98). Chez les patients atteints d'HTA, l'ICC était faible pour le nombre de CEC (0,143 ; -0,27–0,51) et modéré en force pour le nombre d'EPC (0,668 ; 0,37–0,84). Chez les témoins sains, l'ICC était faible pour le nombre de CEC (0,378 ; -0,26-0,78) et bon pour le nombre d'EPC (0,846 ; 0,59-0,96). Un graphique de Bland-Altman a montré une corrélation positive des variations des différences et de l'augmentation du nombre médian de CEC ; il n'y avait pas de tendances distinctes pour le nombre médian d'EPC. Nos analyses indiquent que la quantification par cytométrie de flux des concentrations d'EPC est fiable chez les patients atteints d'ICFEp, d'ICFEr, de DN et d'HTA. La quantification des concentrations de CEC a montré une faible fiabilité test-retest dans tous les groupes de patients. Des recherches supplémentaires sont nécessaires pour élucider la nature de ce résultat, qui pourrait être dû à une plus grande variabilité biologique chez les patients atteints de DE sévère.Identifiant d’enregistrement de l’essai clinique : NCT02299960.