Journal des techniques immunologiques et des maladies infectieuses

Mise au point d'une réaction en chaîne par polymérase (PCR) quantitative fluorescente en temps réel pour la détection du virus de la grippe aviaire hautement pathogène de sous-type H5N1

Miao-lian Tan, Yuan-yuan Niu, Wei Shui, Jiancong Lin, Ming Li et Changran Zhang

Les souches hautement pathogènes du virus de la grippe aviaire (AIV), qui sont des virus de la grippe A, provoquent de graves maladies chez les volailles domestiques et les humains. L'objectif de cette étude était d'établir un test RT-PCR quantitatif fluorescent pour la détection du sous-type H5N1 du virus de la grippe aviaire hautement pathogène (AIV). Les ensembles de sondes spécifiques aux sous-types H5 et N1 ont été développés sur la base des séquences du virus de la grippe aviaire détectées en Chine. Deux paires d'amorces et deux sondes fluorescentes ont été rigoureusement conçues et optimisées dans un système de réaction. Selon la quantité d'ARN plasmidique extraite des souches H5N1, la courbe standard DWQBGWDWQBGW de la PCR quantitative fluorescente a été tracée et tous les échantillons ont ensuite été testés au moyen de la PCR en temps réel. Le test du sous-type H5N1 de l'AIV hautement pathogène a été identifié comme étant spécifique et son niveau de sensibilité était de 102~103 copies/réaction. La courbe standard a été réalisée à 109～105 copies d'ADN/réaction. Il n'a fallu que trois heures entre l'extraction de l'ARN viral et la fin du test. Le test était facile à réaliser et hautement reproductible. En conclusion, la PCR quantitative fluorescente, décrite ici, fournit une méthode rapide, spécifique et sensible pour détecter non seulement les gènes H5 mais aussi N1.